L’ipertrofia del legamento flavum nella stenosi della colonna vertebrale lombare è associata a un aumento del livello di miR-155
Abstract
L’ipertrofia del legamento flavum (LF) contribuisce alla stenosi spinale lombare (LSS) ed è causata principalmente dalla fibrosi. Dati recenti indicano che il miR-155 gioca un ruolo cruciale nella patogenesi di diverse malattie fibrotiche. Questo studio mirava a verificare l’ipotesi che miR-155 eserciti effetti sullo spessore della LF regolando l’espressione del collagene. Abbiamo trovato che lo spessore della LF e l’espressione del collagene I e del collagene III erano più alti nella LF di pazienti LSS che nella LF di pazienti con ernia del disco lombare (LDH). L’espressione di miR-155 era significativamente più alta in LF dal gruppo LSS che in LF dal gruppo LDH (). il livello di miR-155 era positivamente correlato con lo spessore di LF (, ), il livello di collagene di tipo I (, ), e il livello di collagene di tipo III (, ). miR-155 mimic ha aumentato l’espressione di mRNA e proteina di collagene I e collagene III nei fibroblasti isolati da LF, mentre miR-155 spugna ha diminuito l’espressione di mRNA e proteina di collagene I e III nei fibroblasti. In conclusione, il miR-155 è un miRNA associato alla fibrosi e può avere un ruolo importante nella patogenesi dell’ipertrofia della LF.
1. Introduzione
La stenosi spinale lombare (LSS) è una condizione comune nei pazienti anziani. La LSS è definita come il restringimento del canale spinale con impingement del midollo o della radice nervosa che provoca i sintomi della radicolopatia o della pseudoclaudicatio. L’ipertrofia del ligamentum flavum (LF) è solitamente coinvolta nella patogenesi della LSS, che può ridurre il diametro del canale spinale e comprimere il sacco durale e le radici nervose, con conseguenti sintomi, anche in assenza di un fibroma dell’anulus rigonfio o di un nucleo polposo erniato o di speroni ossei.
LF è una struttura elastica ben definita che consiste di fibre elastiche (80%) e collagene (20%). I tessuti LF ipertrofizzati diventano disorganizzati e mostrano livelli diminuiti e degenerazione delle fibre elastiche ma livelli aumentati di fibre collagene. Durante l’ipertrofia LF, ci sono aumenti nell’espressione e nell’attività di varie molecole, comprese le metalloproteasi di matrice (MMPs), gli inibitori tissutali delle metalloproteasi di matrice (TIMPs), il fattore di crescita derivato dalle piastrine-BB (PDGF-BB), il fattore di crescita del tessuto connettivo (CTGF), la proteina morfogenetica ossea (BMP) e le citochine infiammatorie.
I microRNA (miRNA) sono molecole di RNA non codificanti a singolo filamento, evolutivamente conservate, di 19-24 nucleotidi che controllano l’espressione genica a livello post-trascrizionale. Le firme di espressione dei miRNA sono state associate a caratteristiche clinicopatologiche e agli esiti di diverse malattie. Tuttavia, si sa molto poco sul ruolo dei miRNA nell’ipertrofia LF. I miRNA svolgono un ruolo cruciale nella degradazione dei tessuti e nella fibrosi. I miRNA potrebbero promuovere la degradazione della cartilagine attraverso la regolazione dell’espressione dei geni che codificano i fattori catabolici come MMP e ADAMTS. In particolare, un aumento significativo dell’espressione di miR-155 è stato osservato in cellule di fibroblasti e tessuti di pazienti affetti da artrite reumatoide. MiR-155 è un tipico miRNA multifunzionale che svolge un ruolo cruciale in vari processi fisiologici e patologici, come la differenziazione del lignaggio ematopoietico, l’immunità, il cancro, le malattie cardiovascolari e la risposta infiammatoria.
In questo studio, abbiamo voluto esplorare il ruolo potenziale del miR-155 nello sviluppo dell’ipertrofia LF in pazienti con LSS. Abbiamo confrontato lo spessore, la degradazione dell’elastina, la fibrosi, l’espressione del collagene I e III e l’espressione del miR-155 in LF di pazienti con LSS con quelli di pazienti con ernia del disco lombare (LDH). Successivamente, abbiamo studiato la correlazione tra il livello di miR-155 e le caratteristiche della LF. Infine, abbiamo esaminato gli effetti del miR-155 sull’espressione dei tipi I e III di collagene in cellule LF umane coltivate.
2. Metodi
2.1. Campioni
I campioni di LF sono stati ottenuti da 15 pazienti (7 maschi, 8 femmine, età media: 65,67 anni, range: 63-71 anni) sottoposti a laminectomia decompressiva a causa di una stenosi spinale lombare degenerativa sintomatica. Come controllo, i campioni LF sono stati ottenuti da 15 pazienti (10 maschi, 5 femmine, età media: 25,17 anni, range: 20-30 anni) con ernia del disco lombare che sono stati gestiti chirurgicamente per questo disturbo. I LF sono stati prelevati da L4/5 e poi sottoposti a colorazione istologica, colorazione tricromica di Masson, analisi immunoistochimica e valutazione biologica. Lo studio è stato approvato dal comitato di revisione etica istituzionale con il consenso informato scritto ottenuto da ogni paziente.
2.2. Misurazione dello spessore della LF
La risonanza magnetica (MRI) è stata eseguita per misurare lo spessore della LF in ciascuno dei 30 pazienti. Sull’immagine assiale T1 pesata attraverso l’articolazione della faccetta, la LF è stata chiaramente osservata come una massa a bassa intensità di segnale proprio sul lato ventrale dell’articolazione della faccetta. Lo spessore massimo del LF è stato tracciato utilizzando la tecnica del cursore manuale da un chirurgo esperto e misurato automaticamente nel sistema PACS. La misurazione di ogni legamento è stata ripetuta tre volte, e il valore medio è stato usato come spessore finale del LF.
2.3. Analisi istologica
I campioni sono stati tagliati sagittalmente, fissati in formalina al 10% per 48 ore e inseriti in un blocco di paraffina. Sezioni a fette sottili (4 μm) sono state preparate e colorate con ematossilina ed eosina (H&E) e tricromia di Masson da un patologo esperto che non conosceva le origini dei campioni. La colorazione H&E ha rivelato la morfologia e la struttura della LF e il grado di degradazione dell’elastina. La colorazione tricromica di Masson è stata utilizzata per identificare la fibra elastica (rosa) e la fibra collagena (blu) e per determinare il grado di fibrosi. Real-Time PCR
L’RNA totale è stato isolato dai campioni o dalle cellule usando TRIZOL (Invitrogen Corp., Carlsbad, CA). Per misurare i livelli di espressione di mRNA dei tipi I e III di collagene, il cDNA è stato trascritto inversamente dall’RNA isolato incubando 500 ng di RNA trattato con DNasi con un kit di sintesi a primo filamento (Advanced Biotechnologies). La PCR in tempo reale è stata eseguita utilizzando il colorante SYBR green in un termociclatore con i seguenti parametri: 40 cicli, 94°C per 30 secondi, 60°C per 20 secondi e 72°C per 15 secondi. Per misurare il livello di miR-155, la RT-PCR è stata eseguita con l’All-in-One miRNA qRT-PCR Detection Kit (Tiangen). Sono stati utilizzati i seguenti primer: collagene I forward: 5′-GTGCGATGACGTGATCTGTGA-3′, reverse: 5′-CGGTGGTTTCTTGGTCGGT-3′; collagene III forward: 5′-GCCAAATATGTGTCTGTGACTCA-3′ e reverse: 5′-GGGCGAGTAGGAGCAGTTG-3′; miR-155 forward TTAATGCTAATCGTGATAGGGGT. Tutti i primer sono stati sintetizzati da Shenggong Inc. Tutti i dati sono stati analizzati utilizzando il metodo comparativo ΔΔCT per calcolare la differenza tra i valori del ciclo soglia (CT) dei geni target e di riferimento in ogni campione.
2.5. Analisi Western Blot
I campioni di tessuto e le cellule coltivate sono stati lisati in tampone RIPA contenente cocktail di inibitori di proteasi. Quantità equivalenti di proteine sono state separate mediante elettroforesi e trasferite su una membrana di trasferimento Immobilon-P (Millipore). Le membrane sono state bloccate con il 5% di latte non grasso in soluzione salina tamponata con Tris e poi incubate con gli anticorpi monoclonali Col 1 o Col 3 (Abcam, USA), seguiti da incubazione con anticorpo secondario coniugato con perossidasi di rafano (Abcam, USA). L’actina (Abcam, USA) è stata usata come controllo di carico.
2.6. Coltura primaria di cellule di fibroblasti LF
I campioni LF sono stati ottenuti asetticamente da sei giovani pazienti sottoposti a chirurgia spinale. I campioni sezionati sono stati tagliati in piccoli pezzi e digeriti in un terreno senza siero (Gibco) contenente 250 U/mL di collagenasi di tipo I (Sigma) a 37°C in un’atmosfera contenente il 5% di CO2. I campioni digeriti sono stati lavati con un mezzo contenente siero per inibire l’attività della collagenasi e poi posti in piatti da 35 mm in Dulbecco’s Modified Eagle Medium e Ham’s F-12 medium (DMEM/F12, Gibco) integrato con 10% di siero fetale bovino inattivato al calore (FBS, Gibco-BRL). Le colture sono state incubate a 37°C in un’atmosfera umidificata contenente il 5% di CO2. Il mezzo è stato cambiato ogni due giorni. Dopo due settimane, le cellule hanno cominciato a migrare dai chip del legamento e hanno formato un monostrato. Le cellule sono state mantenute per due o tre settimane in DMEM/F12 contenente 10% FBS, 1% v/v penicillina e streptomicina (Sigma) in un incubatore con un’atmosfera umidificata contenente 5% di CO2. I livelli di espressione proteica dei tipi I e III di collagene sono stati rilevati tramite immunocitochimica come descritto in precedenza.
2.7. Costruzione del vettore
la sequenza del precursore miR-155 è stata ottenuta da miRBase (http://www.mirbase.org/): CTGTTAATGCTAATCGTGATAGGGGTTTTTGCCTCCAACTGACTCCTACATTAGCATTAACAG. La sequenza hsa-miR-155 era UUAAUGCUAAUUGUGAUAGGGGU, e la sequenza di DNA complementare era ACCCCTATCACAATTAGCATTAA. Le spugne di miR-155 sono state progettate come tre sequenze complementari incomplete. Gli oligo sono stati clonati in pCDH-GFP per fare pCDH-miR-155 o pCDH-miR-155-sponge plasmid.
2.8. Per la trasfezione, le cellule 293T sono state coltivate a 37 ° C in un incubatore al 5% di CO2 fino a quando le cellule hanno raggiunto il 70-80% di confluenza, e le cellule monostrato sono state trasfettate con PCDH-GFP, pCDH-miR-155, o pCDH-miR-155-sponge plasmide mescolato con psPAX2 e pMD utilizzando liposomi. Il mezzo di coltura è stato scartato dopo 4 ore, e le cellule sono state lavate 3 volte con PBS. Infine, 15 mL di terreno di coltura cellulare contenente 10% di siero fetale bovino è stato aggiunto e le cellule sono state coltivate per 24 ore. Poi, i surnatanti contenenti GFP (gruppo bianco), miR-155 (gruppo OE), o miR-155 spugna (gruppo Sponge) lentivirus sono stati raccolti e utilizzati per infettare le cellule fibroblasti. Un altro lentivirus contenente un miRNA senza senso è stato usato come controllo (gruppo CON).
2.9. Analisi statistica
I dati sono stati espressi come media ± SD e analizzati utilizzando il pacchetto di analisi statistica SPSS versione 12 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Le misurazioni dello spessore LF sono state confrontate utilizzando il test t di Student. Le differenze nei livelli di espressione di collagene I, collagene III, mRNA e proteine e il livello di miR-155 tra i gruppi sono stati valutati da un modo ANOVA. Le correlazioni tra lo spessore della LF, il collagene I, il collagene III e i livelli di miR-155 sono stati analizzati con il metodo Spearman. è stato considerato statisticamente significativo.
3. Risultati
3.1. Spessore del LF
Lo spessore della porzione centrale del LF è stato misurato. Lo spessore medio della LF era 2,8 ± 0,7 mm (range: 1,63-3,87 mm) nel gruppo LDH e 5,3 ± 1,0 mm (range: 3,95-7,48 mm) nel gruppo LSS. Questa differenza era significativa ().
3.2. Degradazione dell’elastina e fibrosi di LF
L’analisi istologica ha mostrato che l’area della fibra elastica è diminuita e l’area del collagene è aumentata in LF dal gruppo LSS, rispetto al gruppo LDH. Nel gruppo LDH, le ricche fibre elastiche erano disposte in ordine parallelo (Figure 1(a) e 1(b)). Tuttavia, nel gruppo LSS, le fibre elastiche erano frammentate, disorganizzate, e focalmente perso, accompagnato dalla proliferazione delle fibre di collagene (Figure 1 (c) e 1 (d)). La colorazione tricromica di Masson ha mostrato che, nel LF del gruppo LDH, una vasta area era colorata di rosa e mostrava una disposizione regolare, indicando una normale condizione non fibrotica (Figure 1(e) e 1(f)), ma nel LF, del gruppo LSS, una vasta area era colorata di blu, indicando la presenza di fibrosi massiva (Figure 1(g) e 1(h)).
(a)(a)
(b)
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(f)
(g)
(h)
(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)
(h)
Analisi istologica di campioni LF da pazienti LSS e LDH. (a) In LF da pazienti LDH, una vasta area era colorata di rosa con una disposizione regolare, indicando una condizione normale, non fibrotica. H& colorazione E ×40. (b) LF di pazienti con LDH. H& colorazione E ×100. (c) In LF da pazienti LSS, le fibre elastiche erano disorganizzate e focalmente perso, accompagnato da una proliferazione di fibre di collagene. Le fibre elastiche avevano anche volumi bassi e diametri irregolari. H& colorazione E ×40. (d) LF da pazienti LSS. H& colorazione E ×100. (e) In LF da pazienti LDH, le fibre elastiche ricche erano regolarmente disposte. Nel grado 0, il <20% dell’area della LF era colorata di blu. Colorazione tricromica di Masson ×40. (f) LF da pazienti LDH. Nel grado 1, il <40% dell’area della LF era colorata di blu. Colorazione tricromica di Masson ×40. (g) In LF da pazienti LSS, una vasta area era macchiata di blu, indicando la presenza di fibrosi massiccia. Nel grado 3, oltre il 60% dell’intera area era colorata di blu. Colorazione tricromica di Masson ×40. (h) In LF da pazienti LSS, nel grado 4, oltre l’80% dell’intera area era colorata di blu. Colorazione tricromica di Masson ×40.
3.3. Espressione dei collageni I e III in LF
I livelli di espressione dell’mRNA di entrambi i collageni I e III sono aumentati significativamente nei campioni LF dal gruppo LSS (Figura 2(a)). L’espressione della proteina dei collageni I e III è più alta nei campioni di LF del gruppo LSS rispetto al gruppo LDH (Figura 2(b) e 2(c)).
(a)(a)
(b)
(c)
(a)
(b)
(c)
L’espressione di collagene I e collagene III in campioni di LF da pazienti LSS e LDH. (a) L’analisi PCR in tempo reale ha mostrato che i livelli di mRNA relativi di collagene I e collagene III in LF erano significativamente più alti nel gruppo LSS che nel gruppo LDH. (b) Analisi Western blot di collagene I e collagene III espressione in LF da LSS e gruppi LDH. (c) I livelli proteici relativi di collagene I e collagene III in LF erano significativamente più alti nel gruppo LSS che nel gruppo LDH.
3.4. Livello di miR-155 in LF
Il livello medio di miR-155 era 1.1748 ± 0.047 (range: 1.1278-1.2218) nel gruppo LDH e 5.1081 ± 0.703 (range: 4.4051-5.8111) nel gruppo LSS. il livello di miR-155 era significativamente più alto nei campioni LF dal gruppo LSS che in quelli dal gruppo LDH (, Figura 3(a)). L’analisi di correlazione ha mostrato che il livello di miR-155 è aumentato in parallelo con lo spessore della LF, mostrando una correlazione positiva e significativa. Il coefficiente di regressione era 0,958 (Figura 3(b)). Inoltre, l’espressione dei tipi I e III di collagene ha mostrato una correlazione positiva e significativa con il livello di miR-155 nella LF (Figura 3(c)). I coefficienti di regressione erano 0,827 () e 0,825 () per i tipi I e III di collagene, rispettivamente.
(a)
(b)
(c)(c)
(a)
(b)
L’espressione del miR-155 in campioni LF di pazienti LSS e LDH. (a) Il livello relativo di miR-155 nella LF era più alto nel gruppo LSS che nel gruppo LDH. (b) Correlazione tra il livello di miR-155 e lo spessore della LF. (c) Un grafico di dispersione che mostra le correlazioni positive tra il livello di miR-155 e i livelli di proteina di collagene I/III nella LF. I coefficienti di correlazione erano 0,825 () e 0,827 (), rispettivamente.
3.5. Il miR-155 aumenta l’espressione dei collageni I e III nei fibroblasti della LF
Per determinare il ruolo del miR-155 nella regolazione dell’espressione dei tipi I e III di collagene nella LF, abbiamo isolato fibroblasti dalla LF e li abbiamo infettati con lentivirus. L’analisi RT-PCR ha mostrato che l’espressione dell’mRNA dei tipi I e III di collagene era aumentata nelle cellule infettate con lentivirus miR-155 mimic rispetto ai controlli (Figura 4(a)). L’analisi Western blot ha mostrato che l’espressione proteica dei tipi I e III di collagene era aumentata nelle cellule infettate con il lentivirus miR-155 mimico rispetto ai controlli (Figure 4(b) e 4(c)). L’immunocitochimica ha confermato che la colorazione dei tipi I e III di collagene era ovviamente più forte nelle cellule infettate con il lentivirus miR-155 mimico rispetto ai controlli (Figure 4(d)-4(g)).
(a)(a)
(b)(b)
(c)(c)
(f)
(g)
(a)
(b)
(c)
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(e)
miR-155 mimic aumenta l’espressione di collagene I e collagene III nei fibroblasti isolati da LF. (a) L’analisi PCR in tempo reale ha mostrato che i livelli di mRNA relativi di collagene I e collagene III erano significativamente più alti nel gruppo OE rispetto ai gruppi Blank e Control. (b) Analisi Western blot dell’espressione di collagene I e collagene III in diversi gruppi di fibroblasti. (c) I livelli proteici relativi di collagene I e collagene III erano significativamente più alti nel gruppo OE rispetto ai gruppi Blank e Control. (d) Gruppo vuoto. (e) Gruppo di controllo. (f) Colorazione immunocitochimica del collagene I nel gruppo OE. (g) Colorazione immunocitochimica del collagene III nel gruppo OE. Marrone indicato colorazione positiva.
Al contrario, l’espressione dell’mRNA dei tipi I e III collagene era diminuita nelle cellule infettate con lentivirus spugna miR-155 rispetto ai controlli (Figura 5(a)). Coerentemente, l’analisi Western blot ha mostrato che l’espressione proteica dei tipi I e III di collagene era diminuita nelle cellule infettate con il lentivirus spugna miR-155 rispetto ai controlli (Figura 5(b) e 5(c)). L’immunocitochimica ha confermato che la colorazione dei tipi I e III di collagene era più debole nelle cellule infettate con il lentivirus spugna miR-155 rispetto ai controlli (Figure 5(d)-5(g)).
(a)(a)
(b)(b)
(c)(c)
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(a)
(b)
(c)
(d)
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(g)
miR-155 diminuisce l’espressione di collagene I e collagene III nei fibroblasti isolati da LF. (a) L’analisi PCR in tempo reale ha mostrato che i livelli di mRNA relativi di collagene I e collagene III erano significativamente più bassi nel gruppo Sponge rispetto ai gruppi Blank e Control. (b) Analisi Western blot dell’espressione di collagene I e collagene III in diversi gruppi di fibroblasti. (c) I livelli proteici relativi di collagene I e collagene III erano significativamente più bassi nel gruppo Spugna rispetto ai gruppi Bianco e Controllo. (d) Gruppo vuoto. (e) Gruppo di controllo. (f) Colorazione immunocitochimica del collagene I nel gruppo Spugna. (g) Colorazione immunocitochimica del collagene III nel gruppo Spugna. Marrone indicato colorazione positiva.
4. Discussione
LF contiene alta concentrazione di elastina, permettendo la contrazione durante la flessione e l’allungamento durante l’estensione. L’ipertrofia LF è nota per causare LSS, con conseguente dolore lombare. In questo studio, abbiamo trovato che lo spessore medio di LF nel gruppo LSS era significativamente maggiore di quello del gruppo LDH. Abbiamo anche osservato fibre elastiche irregolarmente disposte, rotte, gonfie e diminuite, ialinizzazione e aumento del numero di fibre collagene nella LF del gruppo LSS. Inoltre, abbiamo trovato che LF dal gruppo LSS ha mostrato un alto punteggio di fibrosi. Questi risultati sono coerenti con gli studi precedenti che mostrano un aumento del contenuto di collagene (fibrosi) e una diminuzione del rapporto elastina-collagene nella LF ipertrofizzata.
A nostra conoscenza, questo è il primo rapporto che descrive la relazione tra ipertrofia LF e l’espressione del miRNA. Studi recenti hanno rivelato un ruolo importante del miR-155 nella patogenesi dell’osteoartrite e delle malattie fibrotiche. Qui, ci siamo concentrati sul ruolo di miR-155 nella patogenesi dell’ipertrofia LF. Abbiamo trovato che miR-155 è stato significativamente upregolato nel tessuto LF dei pazienti LSS rispetto ai pazienti LDH. L’analisi di correlazione ha mostrato che l’aumentata espressione di miR-155 era correlata allo spessore, al punteggio fibrotico e all’espressione dei tipi I e III di collagene nella LF. Inoltre, abbiamo isolato i fibroblasti da LF e abbiamo dimostrato che il miR-155 ha regolato l’espressione del collagene di tipo I e III in queste cellule.
L’infiammazione cronica è un importante fattore di rischio per l’ipertrofia LF. La progressione dell’ipertrofia della LF è accompagnata da un alto grado di infiltrazione dei macrofagi. Inoltre, i macrofagi sono stati identificati come una delle principali fonti cellulari di citochine infiammatorie nell’ipertrofia LF. Recentemente, miR-155 è stato identificato come un componente della risposta primaria dei macrofagi ai mediatori infiammatori. Inoltre, diversi studi hanno dimostrato che il fattore di crescita trasformante (TGF-) è coinvolto nel processo di cambiamenti ipertrofici durante LF . È interessante notare che il miR-155 è un bersaglio diretto della via TGF-/Smad, che induce l’espressione del miR-155 attraverso Smad4. Il miR-155 contribuisce alla regolazione della via TGF-/Smad puntando direttamente SMAD2 e SMAD5. Questi risultati stabiliscono un forte legame tra miR-155, TGF- pathway, e ipertrofia LF e indicano che miR-155 è un fattore critico che regola la fibrosi dei fibroblasti e ipertrofia LF.
Ci sono diverse limitazioni al nostro studio attuale. In primo luogo, la nostra dimensione del campione è stata limitata dal comitato di revisione etica. In secondo luogo, non abbiamo potuto raccogliere LF normali e invece abbiamo usato campioni di controllo da pazienti con ernie del disco, la cui età media era significativamente più giovane di quella dei pazienti con stenosi spinale. Pertanto, non possiamo escludere la possibilità che l’invecchiamento possa avere un impatto sull’espressione del miR-155. Sarebbe stato ideale avere due diversi controlli: campioni abbinati per età e sesso da pazienti senza stenosi e campioni abbinati per sesso da tardo-adolescenti. Il primo avrebbe eliminato l’età come variabile indipendente, poiché non tutti i pazienti anziani sviluppano una stenosi spinale. Può essere che, proprio come l’aterosclerosi, una predisposizione genetica alteri i fattori biochimici che contribuiscono alla condizione patologica. Campioni di tardo-adolescenti che non hanno alcun cambiamento degenerativo ci permetterebbero di determinare l’entità delle perturbazioni che si verificano nella stenosi spinale. Sfortunatamente, entrambi questi controlli ideali sono raramente sottoposti a trattamento chirurgico, rendendo quasi impossibile raccogliere abbastanza campioni in modo tempestivo. Così, alla fine abbiamo optato per i nostri controlli attuali. Anche se ammettiamo che non sono ideali, sono ragionevoli e adeguati per testare l’ipotesi che abbiamo postulato in questo studio. Infatti, nella letteratura sull’ipertrofia del legamento flavum, il gruppo dell’ernia del disco giovane è stato spesso usato come gruppo di controllo. Conclusioni
In sintesi, abbiamo trovato che il miR-155 è stato upregolato in pazienti con ipertrofia del ligamentum flavum lombare. Il livello di espressione di miR-155 era correlato allo spessore e al grado di fibrosi del LF. miR-155 ha aumentato l’espressione dei tipi I e III di collagene nei fibroblasti del LF. Questi dati suggeriscono che miR-155 è un miRNA associato alla fibrosi e può svolgere un ruolo importante nella patogenesi dell’ipertrofia della LF.
Conflitto di interessi
Gli autori dichiarano che non c’è conflitto di interessi riguardo alla pubblicazione di questo articolo.
Contributo degli autori
Jianwei Chen e Zhanchun Li hanno progettato lo studio e scritto l’articolo. Jianwei Chen, Guibin Zhong, Lie Qian, Zhanchun Li, Zhiguang Qiao, Bin Chen e Hantao Wang hanno eseguito gli esperimenti e analizzato i dati. Tutti gli autori hanno letto e approvato il documento finale.
Riconoscimenti
Gli autori sono grati al Dr. Zhiguang Qiao per il suo lavoro preliminare per questo studio e ringraziano il Biomedical Research Center in Renji Hospital, School of Medicine, Shanghai Jiaotong University, per l’uso degli strumenti. Lo studio è stato sostenuto dalla National Natural Science Foundation of China (81370976) e Shanghai Natural Science Foundation, Cina (13zr1424900).