Definition of Electrophoresis
L’elettroforesi è una tecnica di separazione che si basa sulla mobilità degli ioni in un campo elettrico.
Gli ioni con carica positiva migrano verso un elettrodo negativo e quelli con carica negativa migrano verso un elettrodo positivo.Per ragioni di sicurezza, un elettrodo è di solito a terra e l’altro è polarizzato positivamente o negativamente.
Gli ioni hanno diverse velocità di migrazione a seconda della loro carica totale, dimensione e forma, e possono quindi essere separati.
La tecnica è usata particolarmente per le macromolecole, come le proteine. A queste molecole viene aggiunta una carica negativa in modo che si muovano verso l’elettrodo positivo.
Un apparato elettrodico consiste in un’alimentazione ad alta tensione, elettrodi, tampone e un supporto per il tampone come carta da filtro, strisce di acetato di cellulosa, gel di poliacrilammide o un tubo capillare.
I tubi capillari aperti sono utilizzati per molti tipi di campioni e gli altri supporti sono solitamente utilizzati per campioni biologici come miscele di proteine o frammenti di DNA.Dopo aver completato una separazione, il supporto viene colorato per visualizzare i componenti separati.
La risoluzione può essere notevolmente migliorata utilizzando la focalizzazione isoelettrica.In questa tecnica il gel di supporto mantiene un gradiente di pH.Mentre una proteina migra lungo il gel, raggiunge un pH che è uguale al suo punto isoelettrico.A questo pH la proteina è neutra e non migra più, cioè, è focalizzata in una banda netta sul gel.
Tecniche elettroforetiche specifiche
- elettroforesi a disco
- elettroforesi capillare
- gel elettroforesi