Definicja endotoksyny i standaryzacja
(b) specyficzność odpowiedzi metazoanów na LPS (poprzez TLR4) jest odrębna od innych odpowiedzi (takich jak na poriny, które aktywują TLR2 lub flagelle, które aktywują TLR5)
(c) obejmuje ona obejmuje rolę endotoksyny w tworzeniu i utrzymywaniu asymetrii OM w proporcji do PL
(d) jej istnienie jako pojedynczej struktury oddzielonej od i przylegającej do innych struktur OM zapewnia kontrast pod względem struktury, funkcji i reakcji immunologicznej (aktywacja TLR).
Należy podjąć wysiłki w celu opracowania nowych testów do wykrywania istotnych składników błony niebędących LPS. Stanowi to krytyczne rozróżnienie. Zamiast opracowywać „naturalną endotoksynę” składającą się z nieoczyszczonych składników „ściany komórkowej”, z których tylko endotoksyna może być wykrywana, poszczególne składniki (endotoksyna, fosfolipidy, poriny, flagellina, itp.) powinny mieć swoje własne oznaczenia i normy jako środek poszerzający możliwości kontroli zanieczyszczeń mikrobiologicznych. Zapewniłoby to niezbędną redundancję, podczas gdy obecnie cały ciężar wykrywania subkomórkowych artefaktów bakterii Gram-ujemnych spoczywa na endotoksynie.
Odpowiednie normy dla badań zanieczyszczeń są ważną częścią badań analitycznych. Zgodnie z USP <>, mieszanina zanieczyszczeń oznaczona jako „naturalna endotoksyna” nie jest endotoksyną, ale mieszaniną, która może zawierać endotoksyny, białka, fosfolipidy, kwasy nukleinowe i poriny. Dzisiejsze testy oparte na Limulusie są specyficzne dla endotoksyny, a nie dla składników ściany komórkowej lub cytoplazmy, które nie są endotoksyną; ta specyficzność jest nieodłączna zarówno w architekturze wykrywania czynnika C Limulusa, jak i TLR4 ssaków. Definicja endotoksyny jest definicją interdyscyplinarną i nie może być swobodnie redefiniowana.
Biografia
Kevin Williams pracował dla Eli Lilly przez 30 lat, opracowując testy QC do wykrywania endotoksyn, kontroli procesów i strategii kontroli surowców/produktów pomocniczych oraz pojemników/ obudów. Napisał i zredagował 2 i 3 wydanie książki Endotoksyny. Obecnie pracuje w firmie Hyglos-bioMérieux.
1. USP40-NF35 (Official as of 1-May-2018)
2. Wang X, Quinn, PJ. Lipopolisaccharide: Ścieżka biosyntezy i modyfikacja struktury. Progress in Lipid Research 2010; 49: 97-107.
3. Ranf S. Immune Sensing of Lipopolysaccharide in Plants and Animals: Same but Different, PLOS Pathogens 2016.
4. Esparza et al. Endotoxin-albumin complexes transfer endotoxin monomers to MD-2 resulting in activation of TLR4, Innate Immunity, Innate Immun. 2012. 18(3): 478-491.
5. Ryu et al. Reconstruction of LPS transfer cascade reveals structural determinants within LBP, CD14, and TLR4-MD2 for efficient LPS recognition and transfer. Immunity 2017. 46, 38-50.
6. Berezin et al. Replacing a Century Old Technique – Modern Spectroscopy Can Supplant Gram Staining. Scientific Reports 2017. 7: 3810.
7. Henderson et al. The Power of Asymmetry: Architecture and Assembly of the Gram-Negative Outer Membrane Lipid Bilayer. Annu. Rev. Microbiol. 2016. 70:255-78.
8. Ursell et al. Analysis of Surface Protein Expression Reveals the Growth Pattern of the Gram-Negative Outer Membrane. PLoS Comput Biol., v.8(9); 2012 Sept. PMC3459847`
9. Jarosławski et al. High-resolution architecture of the outer membrane of Gram-negative bacteria Roseobacter denitrificans, Molecular Microbiology 2009. 74(5), 1211-1222.
10. Oestreicher, Taoka, and Fukumori. A comparison of the surface nanostructure from two different types of gram-negative cells: Escherichia coli i Rhodobacter sphaeroides, Micron 2015. 72, 8-14.
12. Liu et al. Immunogenic characterization of outer membrane porins OmpC and OmpF of porcine extraintestinal pathogenic Escherichia coli. FEMS Microbiol Lett 2012. 337: 104-111.
13. Pérez-Toledo M. Salmonella Typhi Porins OmpC and OmpF Are Potent Adjuvants for T-Dependent and T-Independent Antigens. Front Immunol. 2017. 8: 230.